1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功。请据下图完成下列问题：
(1)基因工程的操作程序主要包括的四个步骤是_ 、 、 、 其中步骤 是基因工程的核心。
（2）图中①DNA是以______________为模板，形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的基因。
（3）图中③代表_________，它往往含 ________基因，以便对目的基因的检测。
（4）图中④表示______________，为使此过程顺利进行，一般需将大肠杆菌用______________处理，以增大其细胞壁的通透性。
（5）图中⑤表示_____________随大肠杆菌的繁殖而进行增殖，此基因在大肠杆菌内表达的标志是____________________________。
