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降钙素是一种多肽类激素,临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低,半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素,从预期新型降钙素的功能出发,推测相应的脱氧核苷酸序列,并人工合成了两条72个碱基的DNA单链,两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段,再利用游离的脱氧核苷酸和Klenow酶补平,获得双链DNA,过程如下图。在此过程中发现,合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。请据图回答:

(1)Klenow酶是一种___________酶,合成的双链DNA有________个碱基对。

(2)获得的双链DNA经EcoRⅠ(识别序列和切割位点-GAATTC-)和BamHⅠ(识别序列和切割位点-GGATCC-)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中,筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。

①设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是保证            的定向连接。

②要进行重组质粒的鉴定和选择,需要大肠杆菌质粒中含有_______________基因。

(3)经DNA测序表明,最初获得的多个重组质粒,均未发现完全正确的基因序列,最可能的原因是合成的核苷酸单链仍较长,产生      现象。

(4)上述制备该新型降钙素,运用的现代生物工程技术是____________________。

答案

   (1) DNA聚合酶  126

   (2)①目的基因  载体(质粒)  ②标记

   (3)缺失碱基  (4)蛋白质工程


解析:

此题考查基因工程和蛋白质工程,合成双链DNA需要DNA的聚合酶,有同一种限制酶切割,目的是使目的基因和质粒载体形成相同的黏性末端。

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